Masaharu Ohta

Scanning electron microscopy of the hepatocyte cytoskeleton in human liver tissue

Portions of eight human livers taken by wedge biopsy or needle biopsy were extracted with 0.5% Triton X-100 and then studied by scanning electron microscopy and immunoelectron microscopy. The wedge-biopsy specimens were perfused with the detergent solution. Needle-biopsy specimens were quickly frozen and cracked and then the cracked tissue was immersed in the detergent solution. The three-dimensional filament network of hepatocytes was visualized. A dense network which consisted of intermediate filaments and microfilaments was observed within the cytoplasm of hepatocytes. These filaments were better preserved in the needle biopsies which were quick-frozen and cracked before extraction than in the wedge biopsies. Variation in the amount of the cytoskeletal filaments was less prominent in the hepatocytes treated by rapid freezing. It is concluded that freeze-cracking is the most favorable method for the study of cytoskeletal pathology in various liver diseases in man.

Six cases of cytomegalovirus hepatitis in healthy adults.

本邦では比較的稀な健常成人に発症したサイトメガロウイルス(CMV)肝炎6症例を経験したので,それらの臨床病理学的特徴につき検討し,さらにEBウイルス(EBV)肝炎と比較検討した.CMV肝炎発症患者は,若年男性に多く,発症時期は夏から秋に多かった.CMV肝炎の臨床像は,発熱等の感冒様症状,肝脾腫がしばしばみられ,血清トランスアミナーゼの上昇は軽度であった.CMV肝炎とEBV肝炎の比較では,CMV肝炎発症年齢はEBV肝炎発症年齢に比べて有意に高齢であった.血清GPT値はCMV肝炎の方が,EBV肝炎に比べて有意に低値であった.CMV肝炎2症例の肝組織像では,核内封入体はみられず,門脈域及び類洞内への単核球の浸潤,肝細胞壊死,胆管障害の所見を認めた.

A case report of non-alcoholic steatohepatitis associated with tiopronin-induced liver injury.

症例は43歳,男性,飲酒歴はない.検診で軽度の肝機能異常と高脂血症を指摘され脂肪肝として経過観察中に肝機能が増悪したため,前医にて非A非B型急性肝炎と診断され,チナプロニン300mgを10日間投与された.入院後も肝機能は悪化し,総ビリルビンの最高値は39.1mg/dlで,著明な胆汁うっ滞が約4ヵ月間持続した.第30病日に腹腔鏡下肝生検を施行し,組織は小葉中心性の肝線維化とMallory bodyを伴う脂肪変性に胆汁うっ滞を合併した像で,アルコール性肝炎と極めて類似した組織像であった.臨床経過およびチオプロニンに対するリンパ球幼若化試験が陽性であり,チオプロニンによる肝障害を合併したnon-alcoholic steatohepatitisと診断した.

Role of intermediate filaments and desmosome in the formation of polarity of hepatocytes.

コラゲナーゼ灌流法で肝細胞を単離,培養開始後,経時的にサイトケラチン(CK)とデスモプラキン(DP)の存在様式を蛍光抗体法で観察した.また,detergent処理した非包埋試料を用い,免疫電顕による検討も行った.単離直後,肝細胞は球形で個々ばらばらに存在し,培養12時間後までは毛細胆管の形成,DPの局在はともに明らかでなかった.培養24時間後,肝細胞は隣接する細胞間で広い範囲で接着し,CKの染色では毛細胆管と考えられる管腔を形成していた.この時,細胞間,毛細胆管周囲にはDPの蛍光を明瞭に認めた.免疫電顕による検討で,中間径フィラメント(IF)が肝細胞内に微細なネットワークを形成し,毛細胆管を支持する裏打ち構造も存在し,DPを標識する金粒子が細胞間接合部,毛細胆管周囲のIF上に多数存在していた.今回の研究から肝細胞の極性形成にIFに関連してデスモソームが重要な役割を担っていることが明らかになった.

Immunoelectron microscopic study of intermediate filaments of hepatocytes in human liver using three kinds of cytokeratin antibodies.

ヒト正常肝生検組織の凍結切片をTriton X-100, nucleaseで処理し,3種の異なる分子量を持つCKに対する抗CK抗体,(1) MA-902; CK No. 8, (2) RPN. 1160; CK No. 18, (3) CAM5.2; CK No. 8, 18 & 19を用い免疫電顕を施行し,ヒト正常肝細胞におけるIFの異質性について,免疫組織化学的に検討した.この方法により,TEMで肝CSが明瞭に観察でき,細胞境界部および毛細胆管周囲に密な網目構造が存在した.細胞質内には直径約10nmの均一かつ平滑なIFが多数存在していた.免疫電顕の検討で,RPN. 1160では一部のIFにのみ,またMA-902やCAM5.2ではほぼ全てのIFに金粒子が標識され,MA-902とRPN. 1160との二重染色免疫電顕で2種の抗体の両方と反応するIFが観察された.以上の成績から,ヒト正常肝細胞にはCK No. 18を持たないIFも存在し,免疫学的に異なる少なくとも2種類のIFが存在することが示唆され,また単一のIFに2種のCKポリペプチドが存在することが証明された.

Transmission and scanning electron microscopy of the human liver cell cytoskeleton.

光顕的に正常肝組織像を呈するヒト肝組織片6個を対象とした.試料採取直後に細切し,凍結割断の後にdetergentで処理する方法と,採取した肝組織片に静注針を刺入しdetergentで潅流する2つの方法を用いた.得られた試料を透過電顕,走査電顕で観察し,肝細胞細胞骨格(H-CS)の二次元的,三次元的存在様式を明らかにした.細胞質全体に亘って中間径フィラメント(IFs)が多数存在し,IFsは接着・吻合を示し,微小管やマイクロフィラメントも観察できた.肝細胞と肝細胞の間で割断された試料では,毛細胆管周囲や細胞境界部が明瞭で,多くのCSが存在し,マイクロフィラメントも多数残存していた.今回の研究成績は,今後ヒトの肝細胞細胞骨格病理の研究に有用であると考えた.

Three dimensional organization of cytoskeleton of hepatocytes in mouse. Comparative study with rat cytoskeleton.

Triton X-100を含む灌流液にて,in situでマウス肝とラット肝を門脈より灌流し,透過電子顕微鏡と走査電子顕微鏡で肝細胞サイトスケレトンを観察した.マウス肝でもラット肝と同様,肝細胞サイトスケレトンを透過および走査電子顕微鏡で明瞭に観察しえた.走査電子顕微鏡による観察では,マウス,ラットともに,主として中間径フィラメントからなるサイトスケレトンの三次元的存在様式を明瞭に捉えることができた.走査電子顕微鏡により,中間径フィラメントの分枝,接触や核および細胞内小器官との接着様式を明瞭に表示しえた.マウスとラットの肝細胞サイトスケレトンには構造的差異はなかった.今回のマウス肝細胞サイトスケレトンの研究は,グリセオフルビン投与マウスでのマロリー体形成機序や,マロリー体とサイトスケレトンとの関係などを研究する上に重要な基礎的情報を与えてくれるものである.