Noëlle Dorion

Methods for In Vitro Propagation of Pelargonium x Hortorum and Others: From Meristems to Protoplasts

Geraniums (Pelargonium spp.) are among the most popular bedding and pot plants (25% of the French domestic market). On one hand, as vegetatively propagated plants, Pelargonium are submitted to pathogen pressure. On the other hand, innovation via interspecific hybridisation faces some difficulties. In this chapter, the two first protocols (from seeds and meristems) explain how in vitro plants free of virus could be obtained. The development of this technique is the long-term preservation of genetic resources via meristem cryopreservation. The third protocol describes propagation of Pelargonium with limited risks of variation. This technique also allows the constitution and the maintenance of a plant-stock from which explants can be taken for other studies. The two last protocols describe plant regenerations from leaf discs and mesophyll protoplasts, used for gene transfer and somatic hybridisation. These protocols were established mainly with Pelargonium x hortorum cultivars, but we propose possible solutions for the other species: P. x peltatum, P. x domesticum, P. capitatum and P. graveolens.

Optimization of elm regeneration in vitro using leaf explants and evaluation of the process in transformation experiments

Se ha desarrollado un procedimiento para la regeneracion del olmo hibrido «Sapporo» resistente a la grafiosis mediante el uso de discos foliares procedentes de plantas cultivadas in vitro y examinadas en ensayos de transformacion. Para ello se requirieron dos pasos: induccion de las yemas (3 semanas), seguido de la elongacion de las yemas (4 semanas). Los meristemas que dieron origen a las yemas se formaron en la cercania de las costillas de corte a partir de diversos tejidos (floema, procambium, parenquima) excepto la epidermis. La regeneracion dependio del uso de agarosa (6 g/l LSM) y de medio MS diluido (1/2). Los mejores resultados (11-14 yemas por explante) se obtuvieron en presencia de 0,1 μM de TDZ y 0,06 μM de IAA y cuando la maltosa (55-110 mM) o el sorbitol (110 mM) se usaron como fuente de carbohidratos. Durante la elongacion del tallo, el TDZ hubo de ser disminuido a 0,01 μM o sustituido por 1-2 μM de BAP y 1,4 μM de GA3. En esta fase fue necesaria una mezcla de 55 mM de sorbitol y 27,5 mM de maltosa. Se desarrollaron al menos 7 tallos por explante que facilmente enraizaron (96%) y se aclimataron cuando se anadio sorbitol (27,5 mM) y carbon activo (2 g/l) al medio de enraizamiento. Los ensayos de transformacion se desarrollaron con las cepas GV3101-pMP90 (pKyGUSintron) de Agrobacterium tumefaciens. Las zonas de regeneracion presentaron una expresion GUS estable. No obstante, todas las yemas cultivadas in vitro murieron en un medio selectivo de enraizamiento (50 mg/l de kanamicina). Cuando se intento la seleccion in vitro (12,5 mg/l de kanamicina), algunas yemas se iniciaron pero la elongacion fue impedida. La susceptibilidad a la neomicina parece ser muy alta, por lo que los marcadores y los pasos de seleccion deben ser cuidadosamente revisados.