Language
Country/Area
No result found
От фиксации тканей до окрашивания: знаете ли вы загадочный процесс иммуногистохимии?
Иммуногистохимия — это метод иммуноокрашивания, суть которого заключается в избирательном распознавании антигенов (белков) в клетках и тканях с помощью антител. Этот метод первоначально развился из метода иммунофлуоресценции, разработанного Альбертом Хьюиттом Кунсом и другими в 1941 году. Со временем иммуногистохимия стала очень распространенной в диагностике рака и фундаментальных исследованиях, помогая ученым изучать распределение биомаркеров и дифференциально экспрессируемых белков в различных биологических тканях.
Подготовка проб
Иммуногистохимию можно применять к ткани, зафиксированной и залитой парафином, или проводить на замороженной ткани. Перед отбором проб необходимо выполнить ряд различных шагов в зависимости от того, как сохранилась ткань. Общие этапы включают: соответствующую фиксацию, извлечение антигена, инкубацию с первичными антителами и последующую инкубацию со вторичными антителами.
Подготовка и фиксация тканей
Неподвижная ткань имеет решающее значение для поддержания структуры ткани и формы клеток. Формула фиксатора, соотношение фиксации к ткани и время фиксации существенно влияют на конечный результат. Обычно в качестве фиксатора используется 10% нейтральный забуференный формалин, а время фиксации обычно составляет 24 часа при комнатной температуре.
Фрагмент
Срезы образцов тканей проводили с помощью микротома. Для тканей, залитых в парафин, общепринятым стандартом является толщина 4 микрон, тогда как толщина криосрезов обычно составляет от 4 до 6 микрон. Толщина срезов имеет решающее значение, поскольку разная толщина может повлиять на видимость антигена, поэтому при выполнении иммуногистохимии необходимо соблюдать особую осторожность.
Извлечение антигена
В фиксированных срезах ткани извлечение антигена делает антигенные участки видимыми для антител. Во время фиксации могут образовываться метановые мостики или поперечные связи аминогрупп, предотвращающие связывание антител. Восстановление скрытой антигенности путем нагревания и вымачивания в буфере является наиболее распространенным методом извлечения антигена.
Примеры с тегами
Метки образцов можно выполнить с использованием антител, меченных флуоресцентными соединениями, металлами или ферментами, для эффективной дифференциации целевых антигенов.
Метод обнаружения
Прямой метод представляет собой одноэтапный метод окрашивания, тогда как непрямой метод включает немеченое первичное антитело, которое сначала связывается с целевым антигеном, с последующим добавлением вторичного антитела, которое связывается с первичным антителом. Благодаря эффекту усиления сигнала непрямого метода его чувствительность выше, и он широко используется при обнаружении множественных антигенов.
Обнаружение репортерных молекул
Обнаруживаемые репортерные молекулы различаются в зависимости от метода обнаружения, наиболее распространенными из них являются хромогенное и флуоресцентное обнаружение. В иммуногистохимии хромогена антитела обычно связываются с ферментами и дают видимый цвет в присутствии субстрата хромогена. При иммунофлуоресцентном обнаружении антитела метят флуорофором.
Применение в клинической практике
Огромную роль в диагностике хирургической патологии, особенно при иммунофенотипировании опухолей (например, выявлении маркеров рака молочной железы), играют методы иммуногистохимии. Его приложения включают нейробиологию и диагностику опухолей, помогая исследователям изучить, как белки ведут себя в конкретных тканях.
Проблемы
В методах иммуногистохимии есть несколько этапов, которые могут привести к различным проблемам, таким как чрезмерное фоновое окрашивание или недостаточная маркировка антигена.
Чтобы решить эти проблемы, исследователям необходимо оптимизировать качество и технологию антител.
Заключение
Иммуногистохимия — это не только эффективный метод обнаружения, но и позволяет нам обнаружить и понять распределение белков в биологических тканях. По мере развития технологий сфера их применения в клинической и исследовательской областях будет продолжать расширяться. Готовы ли вы исследовать новые горизонты, которые может открыть эта технология?
