Language
Country/Area
No result found
Как использовать технологию поиска антигена для восстановления возможностей визуализации белка?
При постоянном развитии науки и техники технология визуализации белка стала одним из незаменимых методов биомедицинских исследований.В частности, технология иммуногистохимии (IHC) позволяет исследователям распознавать и локализовать белки в биологических тканях посредством связывания специфических антител с антигенами.Эта технология имеет большое значение для диагностики аномальных клеток, таких как раковая ткань.Тем не менее, процесс визуализации белков часто скрывается антигенами во время иммобилизации и обработки.В настоящее время особенно важно введение технологии поиска антигена.
Необходимость технологии поиска антигена
Методы поиска антигена предназначены для структурных изменений, которые происходят во время фиксации образцов, что может привести к маскированию антигеновых сайтов.Обычно фиксированные образцы получают реакции сшивания с помощью фиксаторов, таких как формальдегид, вызывая безвестность антигенных эпитопов.Используя технологию поиска антигена, мы можем восстановить эти скрытые антигены, тем самым улучшая визуализацию белков.
Наиболее распространенным методом для извлечения антигена является высокая температурная обработка, обычно впитывая секции в буфере, который может разрушить сшитую структуру и восстановить доступность к антигенскому участку.
Процесс приготовления образца
При выполнении иммуногистохимии требуется серия этапов подготовки образцов, которые имеют решающее значение для последнего результата окрашивания.Основной процесс обычно включает фиксацию, сечение, поиск антигена и инкубацию с антителами и т. Д.
фиксация и нарезка
Фиксирование является ключевым этапом в поддержании морфологии тканей, а 10% нейтрального буферизации формальдегида обычно используется в качестве фиксатора.После завершения фиксации образец должен быть нарезан, обычно с толщиной 4-6 микрон, что может обеспечить достаточную презентацию антигена.В то же время парафин должен быть удален перед выполнением секции.
Специальные методы для поиска антигена
Методы поиска антигена обычно основаны на физических или химических методах для уничтожения фиксированных и сшитых структур.Существует много способов обработки высоких температур, и общие методы включают микроволновое отопление, водяные бани и пар под давлением.Поиск антигена также может дополнительно улучшить прочность сигнала для участков, фиксированных с помощью этанола или ацетона.
Лечение с неспецифическим связыванием антител также имеет решающее значение, а фоновое окрашивание может быть эффективно уменьшено с использованием нормального буфера сыворотки или профессионального блокировки.
окрашивание и визуализация
После завершения процесса подготовки образца следующим шагом является выполнение окрашивания образца.Этот процесс обычно требует использования антител, помеченных репортерами или ферментами с небольшими молекулами для специфической маркировки интереса антигена.Эти маркеры могут сделать антиген видимым под микроскопом.В зависимости от различных методов обнаружения, антитело может быть моноклональным или поликлональным, первое обычно нацелено на один эпитоп специфического антигена, а последний может распознавать несколько эпитопов.
Выбор метода обнаружения
Пять основных методов обнаружения включают прямое обнаружение и косвенное обнаружение.Прямое обнаружение относительно простое и может быть выполнено только одним меченным антителом.Тем не менее, метод косвенного обнаружения более чувствителен, поскольку он позволяет множественным меченным вторичным антителам связываться с первичными антителами, и этот эффект усиления сигнала повышает точность обнаружения.
анализ тестирования и расчетов
После окрашивания необходимо наблюдать за характеристиками антигена под микроскопом.Использование показателей окрашивания, таких как метод сканирования (EDX), может выполнять полукалитационный и количественный анализ интенсивности сигнала, что делает сравнение более очевидных сравнения паттернов экспрессии белка.
Карта экспрессии белка
Исследователи могут использовать иммуногистохимию для картирования экспрессии белка в нормальных и поражениях.Эта технология сочетает в себе технологию микрочипов ткани и может эффективно отображать паттерны экспрессии белка в различных типах тканей.База данных MAP -белкового белка обеспечивает отличную платформу, которая помогает исследователям понять, как белки распределяются в разных тканях.
Благодаря важности иммуногистохимии в клинико -патологии, это может не только помочь диагностировать рак, но и обеспечить важную основу для последующего лечения.На этом фоне мы не можем не думать о том, какие новые технологии будут доступны в будущем, что позволит нам более глубоко понять функции и функции белков?
