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Come utilizzare la tecnologia di ricerca dell'antigene per ripristinare le capacità di visualizzazione delle proteine?
Con il continuo progresso della scienza e della tecnologia, la tecnologia di visualizzazione delle proteine è diventata uno dei metodi indispensabili nella ricerca biomedica.In particolare, la tecnologia immunoistochimica (IHC) consente ai ricercatori di riconoscere e localizzare le proteine nei tessuti biologici attraverso il legame di anticorpi specifici agli antigeni.Questa tecnologia è di grande significato per la diagnosi di cellule anormali, come il tessuto canceroso.Tuttavia, il processo di visualizzazione delle proteine è spesso oscurato dagli antigeni durante l'immobilizzazione e l'elaborazione.Al momento, l'introduzione della tecnologia di ricerca dell'antigene è particolarmente importante.
La necessità della tecnologia di ricerca dell'antigene
Le tecniche di ricerca dell'antigene sono progettate per cambiamenti strutturali che si verificano durante la fissazione di campioni, che possono portare al mascheramento dei siti di antigene.Di solito, i campioni fissi produrranno reazioni di reticolazione attraverso fissattivi come la formaldeide, causando oscurità degli epitopi di antigene.Usando la tecnologia di ricerca dell'antigene, possiamo ripristinare questi antigeni nascosti, migliorando così la visualizzazione delle proteine.
Il metodo più comune per il recupero dell'antigene è il trattamento ad alta temperatura, di solito ammollo in tampone, che può distruggere la struttura reticolata e ripristinare l'accessibilità al sito dell'antigene.
Processo di preparazione del campione
Quando si eseguono l'immunoistochimica, sono necessarie una serie di fasi di preparazione del campione, che sono cruciali per il risultato finale della colorazione.Il processo di base di solito include fissazione, sezionamento, recupero dell'antigene e incubazione con anticorpi, ecc.
fissazione e taglio
Il fissaggio è un passo chiave per mantenere la morfologia dei tessuti e la formaldeide tamponata neutra al 10% viene generalmente utilizzata come fissativo.Dopo il completamento della fissazione, il campione deve essere tagliato, di solito con uno spessore di 4-6 micron, il che può garantire una presentazione di antigene sufficiente.Allo stesso tempo, la paraffina deve essere rimossa prima di eseguire il sezionamento.
metodi speciali per la ricerca dell'antigene
Le tecniche di ricerca dell'antigene di solito si basano su metodi fisici o chimici per distruggere strutture fisse e reticolate.Esistono molti modi per trattare le alte temperature e le tecniche comuni includono riscaldamento a microonde, bagni d'acqua e vapore pressurizzato.La ricerca dell'antigene può anche migliorare ulteriormente la potenza del segnale per le sezioni fissate con etanolo o acetone.
Anche il trattamentocontro il legame anticorpale non specifico è cruciale e la colorazione di sfondo può essere effettivamente ridotta utilizzando il normale siero o il bloccante professionale.
tintura e visualizzazione
Dopo il completamento del processo di preparazione del campione, il passo successivo è eseguire la colorazione del campione.Questo processo di solito richiede l'uso di anticorpi etichettati con giornalisti o enzimi di piccole molecole per etichettare specificamente l'antigene di interesse.Questi marcatori possono rendere l'antigene visibile al microscopio.A seconda di diversi metodi di rilevamento, l'anticorpo può essere monoclonale o policlonale, il primo di solito mira a un singolo epitopo di un antigene specifico e il secondo può riconoscere più epitopi.
Selezione del metodo di rilevamento
I cinque principali metodi di rilevamento includono il rilevamento diretto e il rilevamento indiretto.Il rilevamento diretto è relativamente semplice e può essere eseguito con un solo anticorpo marcato.Tuttavia, il metodo di rilevamento indiretto è più sensibile perché consente agli anticorpi secondari etichettati multipli di legarsi agli anticorpi primari e questo effetto di amplificazione del segnale migliora l'accuratezza del rilevamento.
Analisi del test e del calcolo
Dopo la colorazione, è necessario osservare le prestazioni dell'antigene al microscopio.L'uso di indicatori di colorazione come il metodo di scansione (EDX) può eseguire un'analisi semiqualitativa e quantitativa dell'intensità del segnale, rendendo più ovvio il confronto dei modelli di espressione proteica.
mappa dell'espressione proteica
I ricercatori possono usare l'immunoistochimica per mappare l'espressione proteica nei tessuti normali e di lesione.Questa tecnologia combina la tecnologia dei microarray tissutali e può visualizzare efficacemente i modelli di espressione proteica in diversi tipi di tessuto.Il database delle mappe proteiche umane fornisce un'eccellente piattaforma per aiutare i ricercatori a capire come le proteine sono distribuite in diversi tessuti.
A causa dell'importanza dell'immunoistochimica in clinicopatologia, non può solo aiutare a diagnosticare il cancro, ma anche fornire una base importante per il trattamento successivo.In questo contesto, non possiamo fare a meno di pensare a quali nuove tecnologie saranno disponibili in futuro che ci permetteranno di avere una comprensione più profonda delle funzioni e delle funzioni delle proteine?
