Alan Cristiano Erig

Micropropagação fotoautotrófica e uso da luz natural

In spite of the micropropagation to be diffused thoroughly and to present advantages in relation to the traditional methods of propagation, its use in commercial scale in the scions production is limited, mainly, due to the high cost for scions obtaintion. The development of photoautotrophic micropropagation systems with the use of natural light appears as potential possibilities of increasing the efficiency of the micropropagation and help in the cost reduction, making it possible commercially. However, the photoautotrophic micropropagation and the use of natural light lack studies. In Brazil, researches with the intention of the use of the natural light in the photoautotrophic micropropagation are practically inexistent, in spite of there bring strong reasons for its research and implementation, mainly, for the fact of Brazil being a country of tropical and subtropical climate, with great readiness of natural light along the year, and being in need of new technologies for the scions production section. This review seeks to discuss aspects related to the photoautotrophic micropropagation and the use of natural light, as possibilities making turn the micropropagation a method of scions production viable commercially.

Estabelecimento e multiplicação in vitro de Physalis peruviana L.

Visando o estabelecimento e a multiplicacao in vitro de Physalis, foram realizados dois experimentos. Para o estabelecimento, testou-se 5 procedimentos de desinfestacao das sementes (P1: Alcool 70% durante 30 segundos; P2: Hipoclorito de Sodio 2,5% durante 3 minutos; P3: Hipoclorito de Calcio 2,5% por 3 minutos; P4: Alcool 70% por 30 segundos + Hipoclorito de Sodio 2,5 % por 3 minutos; P5: Alcool 70% por 30 segundos + Hipoclorito de Calcio por 3 minutos). Metade das sementes foi mantida no escuro e a outra metade foi transferida para sala de crescimento com 16 horas de fotoperiodo, densidade de fluxo luminoso de 42 µmol.m-2 s-1 e temperatura de 25 + 2 oC. Ao final dos 28 dias, o procedimento 3 mostrou as maiores taxas de contaminacao in vitro . Sendo que as maiores porcentagens de germinacao foram obtidas nos procedimentos de desinfestacao 1, 2 e 4. Para a multiplicacao foram avaliados os meios de cultura MS e MS¾ (reduzido em 25% dos sais do meio inteiro), e as concentracoes de: 0,0; 0,1; 0,2 ou 0,3 mg L-1 de BAP. Foram utilizados frascos com 30 mL de meio de cultura com o pH ajustado para 5,8 e agar na concentracao de 6 g L-1. Ao final de 21 dias, observou-se maior numero de brotacoes na concentracao de 0,3 mg L-1 de BAP para os dois meios de cultura estudados.

Efeito de doses e fontes de carboidratos no crescimento de plantas de ginseng Brasileiro [Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen] Cultivadas in vitro

Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen e uma das especies de ginseng brasileiro usada popularmente como planta medicinal. Com este trabalho objetivou-se avaliar o efeito de doses (15, 30, 45 e 60 g.L-1) e fontes de carboidratos (sacarose, frutose, glicose, maltose e lactose) no crescimento dessas plantas cultivadas in vitro. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado com 15 repeticoes por tratamento. A parcela experimental consistiu de um tubo de ensaio contendo 10 mL de meio MS e um segmento nodal de 1,0 cm de comprimento e sem folhas. Os parâmetros avaliados aos 41 dias apos a inoculacao foram o numero de brotacoes, o numero total de segmentos nodais por plântula, a altura media das brotacoes, a altura da maior brotacao, a massa fresca e seca da parte aerea e a massa seca das raizes. A melhor fonte de carbono para o crescimento in vitro da P. glomerata foi a sacarose, e a lactose e inapropriada. O numero total de segmentos nodais, altura media das brotacoes, altura da maior brotacao, massa fresca e seca da parte aerea e a massa seca de raizes aumentam pelo acrescimo das doses de sacarose, e em 30, 45 e 60 g.L-1 foram significativamente maiores do que aquelas proporcionadas pelas demais fontes de carbono.

Multiplicação in vitro do porta-enxerto de macieira cv. Marubakaido: efeito da orientação do explante no meio de cultura

The aim of this study was evaluate the effect of the vertical and the horizontal orientation of the explant in the culture medium, in the in vitro multiplication, for the apple rootstock cv. Marubakaido. The culture medium used was the MS with N reduced to ¾ of the original concentration, myo-inositol (100mg.L-1), sucrose (40g.L-1) and agar (6g.L-1), suplemented with BAP (4.44mM) and PPMTM (0.2ml.L-1). Stem segments with two buds and the apex excised were used as explants. After the inoculation, the flasks with the explants were incubated at 16 hour of photoperiod, 25±2oC temperature, with irradiation of 25µmoles.m-2.s-1. The number of shoots and buds, the rate of multiplication and the height of the larger shoot were evaluated after 40 days of cultivation. The highests shoot number, number of buds and the largest rate of multiplication were obtaineds with the explant in the horizontal orientation in the culture medium. There were not significant difference with vertical and horizontal orientation of the explant in the culture medium for the height of the larger shoot.

6-Benzilaminopurina e ácido indolbutírico na multiplicação in vitro da amoreira - preta (Rubus idaeus L.), cv. Tupy

SUMMARY This work aimed to evaluate the effect of different BAP levels (0; 2; 4; 6; 8 and 10 µ M) and IBA (0; 0.5 and 1 µ M) on the in vitro multiplication of blackberry, cv. Tupy. The MS nutrient medium was supplemented with myo–inositol (100mg. l -1 ), sucrose (30g. l -1 ) and agar (6g. l -1 ). The cultures were inoculated and then kept at a 16 hour-photoperiod, temperature of 25 ± 2oC and 25µmoles.m -2 .s -1 radiation. The number of buds and shoots was evaluated weekly for one month. In the final evaluation, it was also taken into consideration the plantlet height and the rate of multiplication. In the absence of IBA, it was observed a higher number of buds, whereas the presence of BAP in the medium, promoted the highest number of buds at 2 µ M, which was achieved in the third week of cultivation. IBA at 0 and 1 µ M promoted a linear decrease in plantlet height when associated with increase in BAP concentrations. It was also observed that an increase in BAP levels for all IBA levels reduced the plantlet height. IBA at 1

Estabelecimento de pereira (Pyrus spp.) in vitro a partir de meristemas e gemas

O trabalho objetivou determinar o melhor tipo de explante e a melhor epoca de coleta destes, visando ao estabelecimento de cultivo in vitro da pereira. No experimento I, gemas e meristemas de pereira das cultivares Carrick e Garber foram isoladas 28 dias apos o inicio da brotacao das plantas matrizes. No experimento II, meristemas das cultivares Carrick, Garber e Smith foram isolados aos 28, 35, 42, 49 e 56 dias apos o inicio da brotacao. O meio de cultura utilizado foi o MS, acrescido de BAP (4,44mM), ANA (0,054mM) e AG3 (0,29mM). Apos a inoculacao, os explantes foram submetidos ao escuro sob temperatura de 25 ± 2oC por um periodo de 4 dias e, em seguida, transferidos para sala de crescimento com 16 horas de fotoperiodo com radiacao de 25µmoes.m-2.s-1 e temperatura de 25 ± 2oC. Os resultados permitiram concluir que, para o estabelecimento in vitro da cultivar Carrick, foi possivel a utilizacao de gemas ou meristemas. Ja para a cultivar Garber, o melhor explante foi o meristema; as epocas de isolamento dos meristemas mostraram comportamento linear para a percentagem de estabelecimento, obtendo-se 92,9% de estabelecimento nos meristemas isolados aos 56 dias apos o inicio da brotacao.

Enraizamento in vitro de marmeleiro cv. MC como porta-enxerto para a pereira e aclimatização das microestacas enraizadas

RESUMOO objetivo deste trabalho foi determinar o tipo e aconcentracao de auxina que promova o enraizamento in vitrode marmeleiro (Cydonia oblonga Mill.) cv. MC como porta-enxerto para a pereira (Pyrus spp) e avaliar a sobrevivenciadas microestacas enraizadas durante a aclimatizacao ascondicoes ex vitro. Os tratamentos consistiram de tres tipos deauxina (acido indolbutirico ‘AIB’, acido naftalenoacetico‘ANA’ e acido 3-indolacetico ‘AIA’), utilizadas em cincodiferentes concentracoes (0, 5, 10, 15 e 20µM). Inicialmenteas microestacas foram cultivadas, durante sete dias, em meiode cultura constituido pelos sais de MS reduzidos a metade de suaconcentracao original, acrescido de mio-inositol (100mgL

Enraizamento in vitro de pereira (Pyrus communis L.) cv. Carrick

The aim of the present work was to evaluate the effects of naphthaleneacetic acid (NAA) and activated charcoal on the in vitro rooting of the pear tree (Pyrus communis L.) cv. Carrick. Therefore pear tree microshoots with approximately 0.8 to 1cm of length were used as explant. The treatments were constituted of three concentration of NAA in the culture medium (0; 3.2 and 6.4mM) and two concentration of activated charcoal (0 and 1%). NAA in the concentration of 3.2 and 6.4mM and in the absence of activated charcoal in the culture medium, showed better rooting rate to pear tree cv. Carrick.

Morfogênese in vitro de brotos de macieira (Malus domestica Borkh.) a partir de fragmentos delgados de folhas

O pre-requisito para se obter sucesso na transformacao genetica de plantas, e tambem para a multiplicacao rapida do genotipo modificado pela micropropagacao, e um protocolo de regeneracao eficiente. Objetivou-se com este trabalho estudar a expressao do potencial morfogenetico de fragmentos delgados de folhas de macieira e otimizar um protocolo de regeneracao visando futuros trabalhos de transformacao genetica. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 2 x 6, com tres cultivares de macieira (Galaxy, Maxigala e Mastergala), dois tipos de explantes (fragmentos finos de folhas cortados no sentido transversal e longitudinal), e seis concentracoes de thidiazuron (TDZ) no meio de cultura (0; 4,54; 9,08; 13,62; 18,16 e 22,7 µM), totalizando 36 tratamentos. Os sais e vitaminas do meio MS foram acrescidos de mio-inositol (100 mg.L-1), sacarose (30 g.L-1), agar (6 g.L-1) e adicionados de 1,6 µM acido naftalenoacetico (ANA). Foram utilizados frascos com capacidade para 150 mL com 6 mL de meio de cultura. Os explantes foram obtidos de plantas cultivadas in vitro, em fase de multiplicacao, 45 dias apos a repicagem, e se constituiram de finos fragmentos da parte mediana de folhas, cortados no sentido transversal (comprimento de 8 a 10 mm) ou longitudinal (comprimento de 10 a 12 mm), ambos com largura aproximada de 1 mm. A porcentagem de regeneracao, a intensidade de formacao de calo e o numero de brotos por explante foram avaliados aos 45 dias de cultivo. A partir dos resultados obtidos concluiu-se que a expressao do potencial morfogenetico dos fragmentos delgados de folhas cortados no sentido transversal e maior do que o daqueles cortados no sentido longitudinal, e o seu cultivo em meio de cultura com 4,54 µM de TDZ, propicia, simultaneamente, elevada porcentagem de regeneracao, maior numero de brotos e menor intensidade de calo.

Avaliação da fidelidade genotípica por marcadores RAPDs de brotações de pereira (Pyrus communis L.) cv. Carrick, regeneradas in vitro

The aim of this work was to evaluate the genotypic fidelity of pear shoots (Pyrus communis L.) cultivar Carrick regenerated in vitro, using RAPD markers. Genomic DNA was extracted from leaves regenerated from pear shoots submitted to different treatments and from micropropagated matrix plants (control plant), using the protocol descripted by FERREIRA & GRATTAPAGLIA (1996). For primer selection, the Kits OPAN, OPA, and OPF (Operon Technologies, Inc.) were used. Seven primers were chosen: OPAN-03, OPAN-14, OPAN-15, OPAN-16, OPA-02, OPA-08 and OPF-04. Amplified products were submitted to horizontal electrophoresis in 1.2% agarose gel, stained with ethidium bromide and visualized under UV light. The result was documented by using a Polaroid Camera. The absence or addition of bands, compared to the control plant pattern was considered somaclonal variation. The seven primers generated 66 fragments with 100% monomorphics bands indicating that none of the primers used was able to detect somaclonal variation on the regenerated shoots.