F. Behar Cohen

Molluscum contagiosum de la paupière inférieure

Le molluscum contagiosum est une lesion tumorale assez courante aux paupieres. Elle atteint volontiers les enfants chez qui elle peut etre multiple par autoinoculation. Son origine virale est etablie, mais sa contagiosite semble surtout affecter l’individu deja porteur de la lesion. Une patiente de 6 ans, affectee d’une localisation tumorale isolee situee a la partie moyenne de la paupiere inferieure evoluant progressivement depuis 8 mois a pu etre examinee. La tumeur avait un aspect nodulaire de quelques millimetres de diametre et etait de couleur identique a l’epiderme sain voisin. Cette lesion fut operee par la technique du prelevement par abrasion (« shave biopsy »). L’histopathologie a permis d’etablir un diagnostic de parfaite benignite, celui de molluscum contagiosum. La patiente fut rapidement perdue de vue.

676 La surexpression intraoculaire du facteur de croissance placentaire : un modèle de rétinopathie diabétique ?

Objectif Nous avons demontre que le Placental Growth Factor (PGF), ligand du VEGFR1, est secrete a des taux eleves dans le vitre des patients diabetiques. Cette etude vise a evaluer les effets de la surexpression chronique de PGF chez le rat. Materiels et Methodes La surexpression de PGF a ete obtenue par electro-transfert de plasmide optimise pVAX2-rPGF, codant pour le PGF de rat. Les yeux temoins ont subi un electro-transfert de saline. Jusqu’a trois mois apres l’electro-transfert, les signes cliniques induits par la secretion du PGF dans les milieux oculaires ont ete suivis par angiographie. Une analyse histologique, immuno-histochimique et des montages a plat de retine ont ete effectues a differents temps. Les complexes « iris-corps ciliaire » ont ete utilises pour controler l’expression de la proteine d’interet au niveau de l’ARN. Resultats Compare aux yeux temoins, l’expression du PGF a ete significativement augmentee dans les cellules traitees par electro-transfert du plasmide codant pour le PGF, ce qui a ete confirme par immunohistochimie. La surexpression chronique de PFG (jusqu’a 3 mois) a entraine une vasodilatation des vaisseaux choroidiens, une alteration de la barriere de l’epithelium pigmentaire retinien associee a des œdemes retiniens, ainsi que la permeabilisation des vaisseaux retiniens et la formation d’anomalies micro-vasculaires intra-retiniennes. Discussion D’autres membres de la famille du VEGF peuvent avoir des activites via les VEGFRs. Le PGF se lie exclusivement au VEGFR1 et sa surexpression chronique permet donc de verifier quels sont les effets dus a l’activation chronique du VEGFR1, seul exprime sur les vaisseaux retiniens normaux. Conclusion Les yeux dans lesquels le PGF est surexprime presentent des caracteristiques histologiques et des anomalies vasculaires retiniennes proches de celles observees au cours de la retinopathie diabetique. Ces resultats confirment l’hypothese selon laquelle ce facteur de croissance est une cible potentielle dans le traitement de la retinopathie diabetique.

190 Œdèmes maculaires : physiopathogénie, bases des traitements et voies d’administration

Introduction Les mecanismes physiopathogeniques de l’œdeme maculaire restent imparfaitement connus. La rupture de la barriere hemato-retinienne interne est un element clairement identifie et facilement analysable par l’angiographie en fluorescence. L’implication de la rupture des autres barrieres retiniennes dans la constitution ou l’entretien de l’œdeme reste a preciser. Les particularites propres a chaque etiologie doivent etre definies. Traitements : Les mecanismes d’action des differents traitements utilises en pratique clinique seront discutes. Un eclairage particulier sera porte aux methodes d’administration et de ciblage des principes actifs. Conclusions Comprendre le role precis des mediateurs inducteurs ou effecteurs de l’œdeme maculaire restent la base de l’innovation therapeutique dans cette pathologie encore imparfaitement traitee.

677 La microglie sous rétinienne est à l’origine des drusen observés chez les souris invalidées pour le récepteur aux chimiokines CX3CR1

But Drusen, the white yellowish deposits that can be seen in funduscopy, are a hallmark of age related macular disease (AMD). Histologically, drusen are believed to be dome-shaped or more confluent lipid accumulations between the retinal pigment epithelium and the choroicapillaries. Objectifs and Methods Recent advances in mouse fundoscopy have revealed the presence of drusen-like structures in chemokine knockout animals in the absence of sizeable dome-shaped material below the RPE. Results We show that aged CX3CR1-/- mice present with drusen-like appearance in funduscopy that is associated with a progressive age-related microglial cell. Discussion As bloated subretinal MCs can also be found in the human disease. Conclusion We demonstrate that the anatomical equivalent of the drusen-like appearance in these mice are lipid bloated subretinal MCs rather than sub-RPE deposits.

380 Toxicité endothéliale cornéenne du peroxynitrite dans les stress oxydatifs

Introduction Nous avons precedemment montre la presence de iNOS et l’impact du stress nitrosant sur la couche de cellules endotheliales (CE) au cours du rejet aigu de greffe sur modele animal (1). Le peroxynitrite (ONOO-) pourrait contribuer a la toxicite CE. Nous avons donc explore l’effet de l’injection en chambre anterieure (CA) in vivo chez le rat a diverses concentrations de ONOO- et observe les consequences sur les CE. Objectifs et Methodes Une courbe de decomposition a temperature ambiante du ONOO- a ete realisee pour chaque solution experimentale. 10 μl d’une des solutions suivantes ont ete injectes en CA de rat Lewis (n = 18 ; 3 yeux/solution, 1 œil par rat) : 500 μm, 250 μm, ou 50 μm ONOO- in 0,05 m NaOH (excipient), ONOO- denature (dONOO), excipient seul ou NaCl 0.9 %. La densite cellulaire endotheliale (DCE) et la pachymetrie ont ete mesurees en microscopie confocale in vivo (HRTII, Heidelberg Engineering, Allemagne). Resultats A 6 heures post injection, la pachymetrie moyenne (Pm) etait respectivement de 158 ± 16 μm, 136 ± 8 μm, 198 ± 9 μm, 192 ± 14 μm 234 ± 13 μm, 306 ± 33 μm et 272 ± 20 μm pour les groupes : non injecte, NaCl ; excipient, dONOO ; 50, 250 ou 500 μm de ONOO-. La Pm augmentait pour le groupe excipient compare au non injecte (p = 0.01) mais l’augmentation etait tres significative comparee aux groupes 250 et 500 μm de ONOO- (p Discussion Le ONOO est produit en cas de stress oxydatif local. Sa toxicite proper sur les cellules corneennes n’avait pas encore ete demontree en conditions in vivo. Conclusion Le peroxynitrite injecte en CA et capable d’induire par lui-meme une perte cellulaire et fonctionnelle endotheliale, y compris a faible concentration.

388 Approche expérimentale des cellules gliales de Müller rétiniennes, état de l’art en 2007

Introduction Les cellules gliales de Muller (CGM) ont une morphologie et topographie tres particulieres dans la retine. Nous proposons une approche anatomique et fonctionnelle experimentale de ce type cellulaire certainement encore mal connu. Objectifs et Methodes Nous rapportons les resultats transversaux d’etudes realisees dans un modele murin C57BL/6 J, developpe initialement pour le modele experimental de neo vascularisation choroidienne induite par photocoagulation laser, et analyses en immuno-histo-chimie. Des injections intra vitreennes (IVT) d’acide α-amino-adipique et de triamcinolone permettent en outre de souligner le role des CGM dans la neo vascularisation et les processus de reparation tissulaires. Discussion La photocoagulation active les cellules gliales de Muller uniquement dans l’axe de l’impact retinien. Elles plongent jusqu’a l’epithelium pigmente rompu, comme pour combler l’espace cree, et donner une cicatrice solide d’amarrage a la choroide. En dehors des impacts retiniens, les CGM ne sont pas activees, sauf en cas d’IVT. Leur destruction induit pour part la mort de photorecepteurs, une desorganisation de la retine, mais aussi une reduction claire de la neo vascularisation choroidienne (role du VEGF). Conclusion Les cellules gliales de Muller ont des proprietes architecturale et trophique et jouent un role dans la cascade cellulaire complexe de la neovascularisation choroidienne, dans ce modele.

382 Résultats à moyen terme de la chirurgie du glaucome avec polymère biodégradable libérant du 5-FU

Introduction La prevention pharmacologique de la cicatrisation tissulaire est un defi majeur dans la chirurgie du glaucome. Nous presentons les resultats d’une etude pilote utilisant un polymere (le poly (ortho ester) de 4 e generation) pour la liberation de 5-fluorouracile en complement de la chirurgie filtrante chez des patients a risque d’echec accru. Materiels et Methodes Cinq yeux de 5 patients ayant un glaucome severe evoluant depuis 11 ans en moyenne et ayant un risque accru d’echec de chirurgie filtrante (echec d’une chirurgie filtrante anterieure dans tous les cas, traitement medical au long cours) ont ete inclus dans cette etude. La technique operatoire consistait a pratiquer une chirurgie filtrante (4 trabeculectomies, 1 sclerectomie profonde non perforante) avec injection sous conjonctivale de poly (ortho ester) charge de 5-FU a 1 % en fin d’intervention. Les patients etaient controles a intervalles reguliers en post-operatoire. Resultats Apres un recul moyen de 15.7 mois, aucune toxicite du produit n’a ete notee. Le polymere de poly (ortho ester) etait totalement degrade chez 4 patients. Une microbulle de polymere bien toleree a ete constatee chez une patiente. La bulle de filtration etait jugee de qualite satisfaisante dans 80 % des cas. Le nombre de traitements anti-glaucomateux etait passe de 2.8 en pre-operatoire, a 1. Le tonus oculaire etait equilibre avec ou sans traitement dans tous les cas. Chez un seul patient, le champ visuel a continue a se degrader en post-operatoire. Discussion Cette etude demontre l’innocuite du polymere utilise en injection sous conjonctivale chez l’homme. Sa superiorite par rapport aux techniques d’application simple d’anti-mitotique en per-operatoire reste a demontrer par des etudes randomisees d’effectifs plus importants. Conclusion L’utilisation de poly (ortho ester) de 4 e generation liberant du 5-FU peut constituer un adjuvant utile a la chirurgie filtrante du glaucome.

387 Efficacité et tolérance du Bevacizumab

Introduction Evaluation de l’efficacite a moyen terme et de la tolerance des injections intravitreennes de bevacizumab. Materiels et Methodes Etude prospective, interventionnelle, non comparative. Inclusion de 37 patients suivis pour neo vascularisation choroidienne, glaucome neo vasculaire ou maculopathie œdemateuse diabetique chronique, traites par injection intravitreenne de bevacizumab (1,25 mg). Les resultats fonctionnels (acuite visuelle) et anatomique (angiographie retinienne, tomographie en coherence optique) sont analyses. Resultats Les patients, âges en moyenne de 66 ans, sont suivis pendant 6 mois. Les resultats preliminaires ne retrouvent aucun effet secondaire local ou systemique. Stabilisation de l’acuite visuelle avec reduction des phenomenes exsudatifs objectives par une nette diminution de l’epaisseur maculaire sur l’OCT dans la majorite des cas. Regression de la rubeose irienne constatee des le 8° jour chez tous les patients traites pour glaucome neo vasculaire. Discussion Les donnees preliminaires sont en faveur d’une bonne tolerance, d’une regression des neo vaisseaux choroidiens et de la rubeose irienne. La reduction de l’œdeme maculaire diabetique est relative. Conclusion En ciblant les indications, le bevacizumab semble etre un traitement prometteur.

385 Une photothérapie sélective et sûre des néovaisseaux choroïdiens chez le singe avec WST11, un nouvel agent photosensibilisant hydrosoluble

But Nous avons demontre l’efficacite de WST11 pour occlure selectivement les neovaisseaux choroidiens (NVC) chez le rat, sans dommages collateraux. Le but de ce travail a ete de definir les parametres optimaux de la phototherapie dynamique (PDT)-WST11 chez le singe avant une evaluation clinique. Materiels et Methodes Des NVC ont ete induits dans 12 yeux de macaques cynomologus au laser argon (50 μm, 575 MW, 0.1 s). Quatorze jours apres, une angiographie en fluorescence (AF) et ICG confirmait les NVC autour de 30 % des points d’impact laser. Deux dosages de WST11 ont ete testes (2.5 et 5 mg/Kg). L’illumination utilisait un laser 753 nm et des intensites de 25 J/cm 2 , 50 J/cm 2 or 100 J/cm 2 (600 W/cm) avec des temps d’illumination (TI) de 1, 5 ou 10 minutes Les angiographies etaient realisees immediatement apres traitement (aigue), a 2, 8, 15, 21 et 28 jours. Avec les parametres d’occlusion selectifs definis, 2 singes etaient sacrifies a J3 apres traitement. Des coupes histologiques semi et ultra-fines au site de lesion a chaque temps etaient effectuees pour evaluer l’effet de la PDT-WST11. A J3, un montage a plat des retines et choroides etait realise apres perfusion du singe au dextran-FITC. Resultats A 25 J/cm 2 aucune occlusion des NVC n’etait observee, quelle que soit la dose de WST11 ou le TI. Sur les coupes histologiques, les cellules de l’epithelium pigmentaire (EP) ou les photorecepteurs autour des impacts laser ne presentaient aucune lesion. Avec 100 J/cm 2 et 5 mg/Kg WST11, TI une minute ou 5 minutes, une occlusion non selective des NVC et retiniens etait observee entrainant une ischemie retinienne. Avec WST11, 2,5 mg/Kg, et 50 J/cm 2 , TI 1 ou 5 minutes, on observait une occlusion selective et stable des NVC sur les angiographies sans occlusion des vaisseaux retiniens, confirmee sur les montages des retines et choroides a plat a J3 et en histologie a J3, J8 et J21. Aucune effusion intra ou sous retinienne n’a ete constatee meme aux temps precoces post PDT avec ces parametres. Conclusion En utilisant les parametres selectifs, WST11 cree une occlusion efficace, selective et stable des NVC chez le singe, sans effets collateraux notables. Ces donnees sont en cours de confirmation sur un essai clinique de phase IIa.

371 La transfection de plasmides dans le muscle ciliaire assure une production prolongée de protéines thérapeutiques dans les milieux oculaires

But Developper une therapie genique sans virus permettant une production prolongee de proteines therapeutiques secretees dans les milieux oculaires, par une technique d’electrotransfert dans le muscle ciliaire. Materiels et Methodes Les experiences ont ete realisees sur des rats Lewis adultes. Differents parametres ont ete testes afin d’optimiser la technique et sa reproductibilite. La voie d’injection (tunnel corneen ou transclerale), la dose de plasmide (10 a 30 μg), le volume injecte (10 a 30 μl), la multiplication des sites d’injection (1 a 3), les parametres electriques ont ete evalues en utilisant des plasmides codant pour la beta-galacosidase ou pour une luciferase secretee. Nous avons evalue la zone de transfection et l’avons correlee aux taux de proteines secretees dans les milieux oculaires. Une cinetique d’expression a ete realisee avec la luciferase secretee. Enfin plusieurs proteines therapeutiques ont ete produites dans le vitre (recepteurs solubles au TNF et au VEGF, Epo, facteurs neurotrophiques). Resultats La transfection de plasmides dans le muscle ciliaire par electrotransfert calibre est une technique simple et efficace permettant une expression selective dans les fibres musculaires lisses. Les cellules musculaires transfectees secretent dans le vitre les proteines codees par les genes transfectes. Les parametres optimizes sont 8 pulses, 200V/cm, 5 Hz. La multi injection favorise la reproductibilite, la quantite de proteines produites est correlee a l’etendue de la zone transfectee et a la quantite de plasmides. La voie transclerale est superieure et le fractionnement des doses de plasmides plus efficace. La production de proteines est stable sur au moins 6 mois. Toutes les proteines testees sont secretees dans le vitre sans taux decelables dans le serum. Conclusion L’electrotransfert de plasmides therapeutiques dans le muscle ciliaire ouvre des perspectives therapeutiques importantes pour toute therapie proteique prolongee intra-oculaire.