Madlles Queiroz Martins

Selection and Validation of Reference Genes for Accurate RT-qPCR Data Normalization in Coffea spp. under a Climate Changes Context of Interacting Elevated [CO2] and Temperature

World coffee production has faced increasing challenges associated with ongoing climatic changes. Several studies, which have been almost exclusively based on temperature increase, have predicted extensive reductions (higher than half by 2,050) of actual coffee cropped areas. However, recent studies showed that elevated [CO2] can strongly mitigate the negative impacts of heat stress at the physiological and biochemical levels in coffee leaves. In addition, it has also been shown that coffee genotypes can successfully cope with temperatures above what has been traditionally accepted. Altogether, this information suggests that the real impact of climate changes on coffee growth and production could be significantly lower than previously estimated. Gene expression studies are an important tool to unravel crop acclimation ability, demanding the use of adequate reference genes. We have examined the transcript stability of 10 candidate reference genes to normalize RT-qPCR expression studies using a set of 24 cDNAs from leaves of three coffee genotypes (CL153, Icatu, and IPR108), grown under 380 or 700 μL CO2 L−1, and submitted to increasing temperatures from 25/20°C (day/night) to 42/34°C. Samples were analyzed according to genotype, [CO2], temperature, multiple stress interaction ([CO2], temperature) and total stress interaction (genotype, [CO2], and temperature). The transcript stability of each gene was assessed through a multiple analytical approach combining the Coeficient of Variation method and three algorithms (geNorm, BestKeeper, NormFinder). The transcript stability varied according to the type of stress for most genes, but the consensus ranking obtained with RefFinder, classified MDH as the gene with the highest mRNA stability to a global use, followed by ACT and S15, whereas α-TUB and CYCL showed the least stable mRNA contents. Using the coffee expression profiles of the gene encoding the large-subunit of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase (RLS), results from the in silico aggregation and experimental validation of the best number of reference genes showed that two reference genes are adequate to normalize RT-qPCR data. Altogether, this work highlights the importance of an adequate selection of reference genes for each single or combined experimental condition and constitutes the basis to accurately study molecular responses of Coffea spp. in a context of climate changes and global warming.

EMERGÊNCIA E CRESCIMENTO INICIAL DE PLÂNTULAS DE TANGERINEIRA ‘CLEÓPATRA’ SUBMETIDAS A DIFERENTES NÍVEIS DE SOMBREAMENTO

Os conhecimentos sobre as respostas das plantas a luminosidade sao de grande importância para a producao de mudas, mas nem sempre estes dados estao disponiveis para muitas especies. O objetivo deste trabalho foi avaliar a emergencia e o crescimento inicial de mudas de tangerineira ‘Cleopatra’ (Citrus reshni Hort. ex Tan) submetidas a diferentes niveis de sombreamento. Os niveis de sombreamento avaliados foram: 0 (pleno sol), 30, 50, 80% de sombra. As sementes foram plantadas em quatro repeticoes com 25 sementes, totalizando o numero de 100 sementes para cada nivel de sombreamento, em tubetes contendo o substrato Plantmax® Florestal. As caracteristicas analisadas foram: indice de velocidade de emergencia (IVE); percentual de emergencia (PER); altura (ALT); numero de folhas (NF); area foliar (AF); massa da materia seca da parte aerea e da raiz (MSPA e MSR) e teores de clorofila a, b e total (CLO A; CLO B; CLO T) nas folhas. Por meio de analises de regressao observou-se resposta linear para altura das plantas em funcao do nivel sombreamento. Para as demais caracteristicas observou-se comportamento polinomial de 2° grau, com as caracteristicas IVE, AF, MSPA e MSR apresentando pontos de maximo. Comportamento diferente dos observados para as caracteristicas NF, CLO A, CLO B e CLO T cujas curvas passam por ponto de minimo. Portanto, ao se analisar o conjunto das caracteristicas avaliadas observa-se que o nivel de sombreamento de 50% proporcionou maior emergencia e crescimento das mudas de tangerineira ‘Cleopatra’.

Efeito do triadimenol sobre o desenvolvimento do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) e atividade microbiológica do solo

RESUMO O triadimenol e um fungicida sistemico, pertencente ao grupo dos triazois, aplicado principalmente via solo no controle de diversas doencas de plantas. Esse trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do triadimenol na cultura do feijoeiro e atividade microbiologica do solo submetido a diferentes concentracoes de triadimenol. Os estudos foram realizados no laboratorio de quimica e na casa de vegetacao, instalados no CCA/Alegre/ES. O delineamento experimental adotado foi o inteiramente casualizado com 6 tratamentos, com 4 repeticoes utilizando 2 vasos por repeticao. Os tratamentos utilizados foram: T1= 0,527 g de baysiston®. (170 Kg/ha); T2= 0,124 g de baysiston® (40 Kg/ha) T3=testemunha; T4= 0,155 g de baysiston® (50 Kg/ha); T5= 0,217 g de baysiston (70 Kg/ha); T6= 0,186 g de baysiston® (60 Kg/ha). Para maioria das caracteristicas avaliadas o tratamento T3 foi estatisticamente superior aos demais tratamentos. Para a atividade microbiologica do solo, a hidrolise de FDA ocorreu em todos os tratamentos com media 244,926 µg FDA hidrolisada hora-1 g-1 de solo, mas nao houve diferenca significativa entre nenhum dos tratamentos.