Renato Paiva

Indução de calos em explantes foliares de Murici-pequeno (Byrsonima intermedia A. Juss.)

O murici-pequeno (Byrsonima intermedia A. Juss.) e um arbusto do cerrado cujo cha da casca do caule apresenta atividade adstringente nas diarreias e disenterias. O genero Byrsonima apresenta taxa de germinacao baixa e emergencia lenta da plântula, dificultando a propagacao sexuada. Objetivou-se com este trabalho obter calos friaveis em explantes foliares de murici-pequeno para estudos futuros em suspensao celular e metabolismo secundario, assim como embriogenese somatica. Avaliou-se o efeito de diferentes concentracoes da auxina 2,4-D e a sua interacao com as citocininas TDZ e BAP na calogenese. Os resultados demonstraram que na ausencia de 2,4-D nao ocorre formacao de calo em explantes foliares. A adicao de BAP ou TDZ nao influencia o processo de calogenese. Para a inducao e proliferacao de calo em explantes foliares de murici-pequeno, os resultados recomendam o uso de meio MS, acrescido de 1,0 mg L-1 de 2,4-D, mantendo os explantes em condicao de escuro por 30 dias.

Luz natural e concentrações de sacarose no cultivo in vitro de Cattleya walkeriana

Cattleya walkeriana e uma das mais apreciadas orquideas do mundo, possuindo grande valor ornamental. A micropropagacao e uma importante ferramenta para reproducao dessa especie. Pelos altos custos de producao atraves da micropropagacao convencional, relacionados a perdas durante aclimatizacao e alto consumo de energia em salas de crescimento, objetivou-se com este trabalho avaliar estrategias alternativas no cultivo in vitro. Foram testados dois diferentes fatores, sendo eles luz (em sala de crescimento convencional, casa de vegetacao com sombreamento de 50%, e casa de vegetacao sem sombreamento) e concentracoes de sacarose (0, 15 e 30 g.L-1). O material se constitui de plântulas previamente germinadas in vitro, em meio MS e cultivadas em sala de crescimento por 90 dias. Luz natural em casa de vegetacao, resultou em aumento no numero de brotos, na espessura foliar e na frequencia e diâmetro dos estomatos, e ocasionou diminuicao do comprimento das plântulas e dos teores de clorofila. Um menor numero de raizes e brotacoes foram formados na concentracao de 15 g.L-1 de sacarose. A ausencia de sacarose resultou em menores teores de clorofila. Pela analise dos resultados, foi possivel concluir que o ambiente de cultivo altera as respostas de plântulas cultivadas in vitro e pode-se recomendar o uso da luz natural e reducao nas concentracoes de sacarose pela metade para a micropropagacao de Cattleya walkeriana, observando-se a fase da propagacao e os objetivos da mesma.

Germinação in vitro de murici-pequeno (Byrsonima intermedia A. Juss.)

ABSTRACT The murici-pequeno ( Byrsonima intermedia A. Juss.) is a medicinal plant of cerrado that presents difficulties of sexual propagation due to a low rate of seed germination and plant emergency in the field. The objective of this work was study aspects of the in vitro germination of murici-pequeno evaluating the effects of MS and WPM culture media and different concentrations of BAP. Mature fruits were collected from native plants and their seeds and embryos excised and used as explants. The results indicated that the most effective culture media used for the in vitro seed and embryo germination were MS and WPM 50%, both with no sucrose, presenting 60 and 100% germination, respectively. The use of BAP is not required for in vitro embryo germination. Index terms: Germination in vitro , murici-pequeno, medicinal plant, Byrsonima intermedia . (Recebido para publicacao em 23 de outubro de 2003 e aprovado em 13 de agosto de 2004) INTRODUCAO Sao poucos os estudos sobre a germinacao de especies nativas do Cerrado. Com o crescente interesse por parte dos pesquisadores, aos poucos se revela o po-tencial dessa vegetacao (COELHO, 1999). No caso do murici-pequeno (

Plant regeneration from callus cultures of Maclura tinctoria, an endangered woody species

SummarySome native species produce seeds with a low frequency of germination accompanied with a period of dormancy. These features make it difficult to produce new phenotypes through sexual propagation. Maclura tinctoria has been considered an endangered species due to extensive use of its wood and low frequency of seed germination. The objective of the present study is to establish an in vitro propagation system for this species. Organogenic friable callus formation from nodal segments has been obtained using woody plant medium (WPM) supplemented with 10.74 μM 1-naphthaleneacetic acid (NAA)+4.43 μM 6-benzylaminopurine (BA). Results indicate that the highest frequency of shoot formation is observed when WPM supplemented with 4.03 μM NAA+4.43 BA is used. For root formation, the use of WPM medium (pH adjusted to 7.0) supplemented with 23.62 μM indole-3-butyric acid (IBA) and 4.7gl−1 activated charcoal is recommended. For acelimatization, subjecting rooted plantlets to 70%, 50%, and 30% mesh screen, each successively for a period of 7 d, has resulted in 97% plantlet survival.

Taxa de multiplicação e efeito residual de diferentes fontes de citocinina no cultivo in vitro de Hancornia speciosa Gomes

A mangabeira destaca-se por possuir um grande potencial como planta frutifera. Suas sementes apresentam recalcitrância, dificultando sua propagacao, o que torna evidente a necessidade da obtencao de mudas por via assexuada. Neste contexto, a cultura de tecidos apresenta-se como uma alternativa a ser utilizada. Entre os fatores que afetam a morfogenese in vitro, as citocininas merecem destaque, pois influenciam na diferenciacao de gemas e no crescimento das brotacoes. Assim sendo, avaliou-se, neste trabalho, a influencia de tres diferentes fontes de citocinina (6-benzilaminopurina BAP, cinetina CIN e thidiazuron TDZ) na inducao de brotacoes in vitro de mangabeira, bem como o efeito residual dessa classe de reguladores no enraizamento e na multiplicacao em subcultivos sucessivos. Os resultados mostraram que, entre as citocininas testadas, a 6-benzilaminopurina foi a que induziu maior numero de brotacoes (1,98), gemas (19,22) e folhas (18,86) por explante, tendo promovido a formacao de brotos de maior comprimento (4,55 cm). As brotacoes oriundas de meio WPM basal apresentaram maior facilidade de enraizamento. A 6-benzilaminopurina foi responsavel pela maior taxa de multiplicacao (9,61) de brotacoes de mangabeira. Os subcultivos sucessivos diminuiram a capacidade de multiplicacao de explantes caulinares da especie.

Calogênese e teores de fenóis e tatinos totais em barbatimão [stryphnodendron adstringens (mart.) coville]

Atualmente, culturas de celulas ou de suspensoes celulares tem sido frequentemente empregadas para produzir fitoterapicos com maiores concentracoes de principios ativos. O barbatimao e uma importante especie medicinal do Cerrado, com taninos nas cascas do caule. Objetivando-se induzir calos em barbatimao e avaliar os teores de fenois e taninos totais, explantes foliares foram inoculados em meio MS suplementado com 30 g L-1 sacarose e acrescidos de 2,4-D (0; 4,52; 9,05; 18,10 μM ) e BAP (0; 4,44; 8,88; 17,75 μM ), na presenca e ausencia de luz. A calogenese ocorreu em meios contendo 2,4-D, na presenca de luz. O numero de calos nao variou com as concentracoes de 2,4-D e maiores valores de materias fresca e seca de calos e teores de fenois totais foram observados em meios com 9,05 μM e 18,10 μM de 2,4-D, na presenca e ausencia de luz. Com BAP, a calogenese ocorreu na ausencia de luz, com maior producao de calos na presenca de 4,44 e 8,88 μM de BAP e maiores valores de materia fresca e seca em meios com 4,44 μM de BAP. Calos crescidos em meios suplementados 4,44 e 17,75 μM de BAP apresentaram maiores teores de fenois totais. Nao se detectaram taninos, independente do regulador empregado.

Organogênese direta em explantes caulinares de mangabeira (Hancornia speciosa Gomes)

A mangabeira, especie nativa do Cerrado, destaca-se por possuir um grande potencial como planta frutifera e produtora de borracha. No entanto, suas sementes apresentam recalcitrância, dificultando sua propagacao, o que torna evidente a necessidade da obtencao de mudas por via assexuada. Neste contexto, o cultivo in vitro apresenta-se como uma alternativa a ser utilizada. Com o presente trabalho, visou-se estabelecer uma metodologia de micropropagacao da mangabeira via organogenese direta. Para a obtencao de brotacoes, segmentos caulinares com ate duas gemas laterais foram inoculados em meio de cultura WPM, suplementado com diferentes concentracoes de BAP (0,0; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0 e 5,0 mg L-1). Para o enraizamento, brotacoes foram inoculadas em meio WPM, suplementado com 0,1% de carvao ativado e diferentes concentracoes de ANA (0,0; 1,0; 2,0 e 3,0 mg L-1) ou AIB (0,0; 1,0; 2,0; 3,0 e 4,0 mg L-1). As brotacoes inoculadas permaneceram em sala de crescimento por 15 dias, quando foram transferidas para meio WPM sem reguladores de crescimento. As concentracoes de 5,0 mg L-1 e 3,0 mg L-1 de BAP foram as mais eficientes na inducao, respectivamente, de brotacoes e gemas. O maior comprimento das brotacoes foi verificado em meio suplementado com 1,0 mg L-1 ou 2,0 mg L-1 de BAP. A maior formacao de calos ocorreu em meio suplementado com 4,0 mg L-1 dessa citocinina. A auxina ANA nao se mostrou eficiente, nas concentracoes testadas, no enraizamento in vitro de brotacoes de mangabeira. Na presenca de 3,0 mg L-1 de AIB, 20% das brotacoes enraizaram.

In vitro morphogenesis of neem from cotyledonary-derived explants

RESUMO ‐ Azadirachta indica A. Juss, popularmente conhecido como nim, e uma especie arborea que se destaca por possuir substâncias de acao inseticida, fungicida, bactericida e nematicida. Sementes de nim foram inoculadas em meio de cultura WPM (Wood Plant Medium) contendo diferentes concentracoes de acido giberelico (GA 3 ) (0; 3,0; 6,0; 9,0; e 12,0 mg L -1 ). Apos 30 dias, cotiledones obtidos a partir de plântulas germinadas in vitro foram inoculados em meio WPM suplementado com acido 2,4-diclorofenoxiacetico (2,4-D) (0,0; 1,0; 2,0; e 3,0 mg L -1 ) e, ou, 6-benzilaminopurina (BAP) (0,0; 1,0; 2,0; e 3,0 mg L -1 ). As culturas foram incubadas no escuro, a 28 o C. Os calos formados foram avaliados com base na sua coloracao e textura, e tres subcultivos foram realizados mensalmente em meio WPM contendo 2,0 mg L -1 BAP, na presenca de luz. A cada 30 dias, avaliou-se o numero de brotos formados a partir dos calos subcultivados. Entre os meios testados, o mais apropriado para germinacao in vitro de nim foi o WPM na ausencia de GA 3 . Explantes cotiledonares cultivados em WPM suplementado com 2,0 mg L -1 de BAP promoveram a maior formacao de calos com potencial morfogenico. Quando esses calos foram transferidos para meio de composicao similar, obteve-se alta formacao de brotacoes ate o terceiro subcultivo.

Effect of cytokinins on in vitro development of autotrophism and acclimatization of Annona glabra L.

The role of cytokinins in the differentiation of the photosynthetic apparatus in micropropagated plants and their effect on the plant’s ability to transition from a heterotrophic to an autotrophic condition during acclimatization was investigated. Annona glabra L. shoots were cultured on woody plant medium supplemented with sucrose and different cytokinins to evaluate leaf tissue for chloroplast development, chloroplast numbers, photosynthetic pigmentation, total photosynthetic potential, and soluble sugar content. Plants were transferred to the rooting medium in the presence or absence of sucrose and then acclimatized. Kinetin and benzyladenine (BAP) stimulated chloroplast differentiation. Inclusion of zeatin in the medium induced the formation of greater numbers of chloroplasts in the leaves, while plants cultivated in the presence of only kinetin and BAP demonstrated greater chlorophyll a and carotenoid content. The use of kinetin and BAP during in vitro culture promoted accumulation of dry matter during the acclimatization phase, especially in plants rooted under autotrophic conditions (without sucrose). Kinetin and BAP promoted development of more leaf area and greater plant survival rates in plant acclimatization on both autotrophic and heterotrophic media. The inhibitory effects of thidiazuron on the differentiation of chloroplasts, accumulation of chlorophyll a, and photosynthetic potential were examined.

Estabelecimento in vitro de estrelícia (Strelitzia reginae Banks.)

A estrelicia (Strelitzia reginae Banks.) e uma planta ornamental tropical de grande valor comercial. O seu desenvolvimento, no entanto, e bastante lento e, consequentemente, a producao de novas mudas tambem. Assim, a cultura de tecidos e uma alternativa para a formacao de novas mudas. Objetivou-se, assim, avaliar o comportamento in vitro, de estrelicia e a viabilidade de propagacao dessa especie por meio desse processo. Para o estabelecimento in vitro utilizaram-se como explantes gemas axilares, segmentos foliares e embrioes imaturos, nao se obtendo sucesso nos dois primeiros. No cultivo dos embrioes, avaliaram-se o periodo para coleta das sementes e o desenvolvimento dos embrioes em diferentes concentracoes de sacarose e do meio de cultura e ainda o uso de diferentes concentracoes de BAP. Determinou-se como melhor periodo para coleta das sementes e extracao dos embrioes 20 semanas apos a polinizacao. As diferentes concentracoes do meio MS nao alteraram o desenvolvimento dos embrioes, sendo esse favorecido pela adicao de 20,64 g/L de sacarose ao meio de cultura. A adicao de BAP proporcionou a formacao de plantas de menor tamanho.