Wolfgang Springer

Cloning and expression of a Streptomyces fradiae neomycin resistance gene in Escherichia coli.

A Streptomyces fradiae DNA sequence, which codes for a neomycin phosphotransferase, has been subcloned from the Streptomyces recombinant plasmid pIJ2 [a chimera between the Streptomyces plasmid SLP1.2 and chromosomal DNA containing a neomycin (Nm) resistance gene] into the BamHI restriction enzyme site of pHV14. Three different recombinant plasmids (pWHR1, pWHR2, pWHR3) have been isolated which transform Escherichia coli to Nm resistance. Southern transfer hybridization experiments show that the recombinant plasmids contain the cloned Streptomyces Nm resistance gene, and lysates of E. coli containing the recombinant plasmids were shown to have Nm phosphotransferase activity, demonstrating that a gene from Streptomyces can be expressed in E. coli.

Analytik bakterientoxischer Effekte mit Hilfe genetisch konstruierter Leuchtbakterien

SummaryLuminescent bacteria bioassays represent an elegant method for fast and reproducible determination of microbial toxicity. A general application of this method is however prevented by the fact that the capability for bioluminescence is restricted to a relatively small group of bacteria with extreme environmental demands. Therefore it seems questionable whether results obtained with those organisms can be used for all interesting applications. It is shown in this paper, that the field of applications for bacterial luminescent assays can be widened using gentechnologically constructed luminescent bacteria.ZusammenfassungLeuchtbakterienteste stellen eine elegante Methode zur schnellen, reproduzierbaren Bestimmung bakterientoxischer Effekte dar. Einer allgemeinen Anwendung steht allerdings entgegen, daß die Luminescenzeigenschaften auf relativ wenige Bakterienfamilien mit zum Teil extremen Standortansprüchen beschränkt sind. Die Übertragbarkeit der Meßergebnisse auf interessierende Anwendungen ist deshalb in vielen Fällen nicht gegeben. In der vorliegenden Arbeit wird am Beispiel eines gentechnologisch konstruierten luminescenten Abwasserstammes gezeigt, daß durch Verwendung von anwendungsspezifischen Testorganismen das Anwendungsspektrum von Leuchtbakterientesten erweitert werden kann.