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Como usar a tecnologia de pesquisa de antígenos para restaurar os recursos de visualização de proteínas?
Com o avanço contínuo da ciência e da tecnologia, a tecnologia de visualização da proteína se tornou um dos métodos indispensáveis em pesquisa biomédica.Em particular, a tecnologia imuno -histoquímica (IHC) permite que os pesquisadores reconheçam e localizem proteínas nos tecidos biológicos através da ligação de anticorpos específicos a antígenos.Essa tecnologia é de grande importância para o diagnóstico de células anormais, como o tecido canceroso.No entanto, o processo de visualização das proteínas é frequentemente obscurecido por antígenos durante a imobilização e o processamento.Neste momento, a introdução da tecnologia de pesquisa de antígenos é particularmente importante.
A necessidade da tecnologia de pesquisa de antígenos
As técnicas de busca de antígenos são projetadas para alterações estruturais que ocorrem durante a fixação de amostras, o que pode levar ao mascaramento de locais de antígeno.Geralmente, as amostras fixas produzem reações cruzadas por meio de fixadores, como o formaldeído, causando obscuridade dos epítopos de antígeno.Usando a tecnologia de pesquisa de antígenos, podemos restaurar esses antígenos ocultos, melhorando assim a visualização de proteínas.O método mais comum para recuperação de antígenos é o tratamento de alta temperatura, geralmente imersão de seções no tampão, que podem destruir a estrutura reticulada e restaurar a acessibilidade ao local do antígeno.
Processo de preparação de amostra
Ao realizar imuno -histoquímica, são necessárias uma série de etapas de preparação de amostras, que são cruciais para o resultado final da coloração.O processo básico geralmente inclui fixação, corte, recuperação de antígenos e incubação com anticorpos, etc.
Fixação e corte
A fixação é uma etapa essencial para manter a morfologia do tecido e o formaldeído tamponado a 10% neutro é geralmente usado como fixador.Depois que a fixação é concluída, a amostra precisa ser cortada, geralmente com uma espessura de 4-6 mícrons, o que pode garantir uma apresentação de antígeno suficiente.Ao mesmo tempo, a parafina deve ser removida antes de executar o corte.
Métodos especiais para pesquisa de antígeno
As técnicas de busca de antígenos geralmente dependem de métodos físicos ou químicos para destruir estruturas fixas e reticuladas.Existem muitas maneiras de tratar altas temperaturas e técnicas comuns incluem aquecimento por microondas, banhos de água e vapor pressurizado.A pesquisa de antígenos também pode melhorar ainda mais a força do sinal para seções fixadas com etanol ou acetona.O tratamentocontra a ligação inespecífico de anticorpos também é crucial, e a coloração de fundo pode ser efetivamente reduzida usando soro normal ou tampão de bloqueio profissional.
Tingimento e visualização
Após a conclusão do processo de preparação da amostra, a próxima etapa é executar a coloração da amostra.Esse processo geralmente requer o uso de anticorpos marcados com repórteres ou enzimas de pequenas moléculas para rotular especificamente o antígeno de interesse.Esses marcadores podem tornar o antígeno visível sob um microscópio.Dependendo de diferentes métodos de detecção, o anticorpo pode ser monoclonal ou policlonal, o primeiro geralmente tem como alvo um único epítopo de um antígeno específico, e o último pode reconhecer vários epítopos.
Selecionando o método de detecção
Os cinco principais métodos de detecção incluem detecção direta e detecção indireta.A detecção direta é relativamente simples e pode ser realizada com apenas um anticorpo rotulado.No entanto, o método de detecção indireta é mais sensível porque permite que vários anticorpos secundários marcados se ligam aos anticorpos primários, e esse efeito de amplificação de sinal melhora a precisão da detecção.
Análise de teste e cálculo
Após a coloração, é necessário observar o desempenho do antígeno sob um microscópio.O uso de indicadores de coloração, como o método de varredura (EDX), pode realizar uma análise semiqualitativa e quantitativa da intensidade do sinal, tornando a comparação dos padrões de expressão de proteínas mais óbvios.
Mapa da expressão de proteína
Os pesquisadores podem usar a imuno -histoquímica para mapear a expressão de proteínas em tecidos normais e lesões.Essa tecnologia combina a tecnologia de microarranjos teciduais e pode efetivamente exibir padrões de expressão de proteínas em diferentes tipos de tecido.O banco de dados de mapas de proteínas humanas fornece uma excelente plataforma para ajudar os pesquisadores a entender como as proteínas são distribuídas em diferentes tecidos.
Devido à importância da imuno -histoquímica na clínicopatologia, ela pode não apenas ajudar a diagnosticar o câncer, mas também fornecer uma base importante para o tratamento subsequente.Nesse contexto, não podemos deixar de pensar em quais novas tecnologias estarão disponíveis no futuro que nos permitirão ter uma compreensão mais profunda das funções e funções das proteínas?
