Language
Country/Area
No result found
A maravilhosa combinação de anticorpos e antígenos: como funciona a imunohistoquímica?
A imunohistoquímica (IHQ) é uma técnica que se baseia na ligação de anticorpos a antígenos específicos, através da qual a presença de antígenos pode ser confirmada em células e tecidos. Este método originou-se da tecnologia de imunofluorescência desenvolvida por cientistas como Albert Hewett Coons em 1941, que lançou as bases para a imunohistoquímica subsequente. Ao longo do tempo, a imunohistoquímica tem sido amplamente utilizada no diagnóstico do câncer, principalmente na identificação de antígenos tumorais. Portanto, compreender os procedimentos da imuno-histoquímica é crucial para a pesquisa médica e biológica.
Atualmente, a imunohistoquímica é considerada uma poderosa ferramenta de exploração de biomarcadores. Através desta tecnologia, os pesquisadores podem determinar a expressão e localização de diferentes proteínas em tecidos biológicos.
Preparação de amostra
A imuno-histoquímica é realizada usando amostras de tecido fixadas e embebidas em parafina e, às vezes, tecido criopreservado (congelado) também é usado. O processo de preparação da amostra inclui fixação, recuperação de antígeno, incubação com anticorpos primários e, finalmente, incubação com anticorpos secundários. Ao longo deste processo, cada etapa é crítica para o resultado final.
Preparação e fixação de tecidos
Antes de realizar a imuno-histoquímica, o tecido é fixado para preservar a estrutura morfológica do tecido. O reagente utilizado para fixação é geralmente formalina tamponada neutra a 10%. O tempo de fixação e a proporção de reagentes afetarão significativamente os resultados experimentais. De modo geral, o tempo de fixação é de 24 horas e a proporção entre fixador e tecido varia de 1:1 a 1:20.
Fatia
O seccionamento das amostras foi realizado utilizando um micrótomo. O tecido embebido em parafina é normalmente seccionado com uma espessura de 4 mícrons, enquanto as criosecções são seccionadas com 4 a 6 mícrons. A espessura dos cortes é um fator crítico para o sucesso da imuno-histoquímica, pois diferenças na espessura podem afetar a apresentação do antígeno observada.
Recuperação de antígeno
A recuperação de antígeno é necessária para a maioria das seções de tecido fixas. O seu objectivo é restaurar as ligações cruzadas formadas durante a fixação para tornar o epítopo acessível ao anticorpo. Um método comum de recuperação de antígeno é imergir as seções em tampão por aquecimento a altas temperaturas.
O sucesso da recuperação antigênica geralmente determina a sensibilidade e a especificidade dos testes imuno-histoquímicos.
Bloquear
Na imuno-histoquímica, a ligação inespecífica de anticorpos pode causar problemas de coloração de fundo. Para reduzir a coloração de fundo, as amostras são frequentemente incubadas com soro normal da espécie a partir da qual o anticorpo secundário foi produzido.
Tag de exemplo
Após a conclusão da preparação da amostra, ela pode ser marcada com anticorpos marcados com compostos fluorescentes, metais ou enzimas. Os anticorpos podem ser policlonais ou monoclonais, dependendo da aplicação desejada.
Método de detecção
Existem dois métodos principais de detecção em imuno-histoquímica: método direto e método indireto. O método direto utiliza anticorpos marcados para reagir diretamente com os antígenos nas secções, enquanto o método indireto é utilizado para melhorar a sensibilidade e aumentar o efeito de amplificação do sinal através da combinação de anticorpos secundários.
A vantagem do método indireto é que ele requer a geração de um número relativamente pequeno de anticorpos secundários marcados, o que é muito útil na marcação múltipla.
Repórter
As moléculas repórter usadas em vários métodos de detecção são diferentes, e as mais comuns são a detecção de cromogênio e fluorescência. Na imuno-histoquímica do cromogênio, os anticorpos são combinados com enzimas e reagem com substratos para produzir uma cor visível. A detecção de fluorescência usa pigmentos fluorescentes para fazer o anticorpo brilhar e facilitar a observação.
Coloração por contagem reversa
Após a conclusão da coloração imuno-histoquímica, a coloração de contagem reversa é frequentemente aplicada para fornecer contraste e ajudar a orientar e visualizar o tecido.
Em muitos casos, a coloração por contagem reversa pode melhorar significativamente a capacidade de observação do pesquisador.
Solução de problemas
Na aplicação da imunohistoquímica, podem ocorrer problemas como coloração de fundo excessiva, coloração fraca do antígeno alvo e artefatos, o que afetará os resultados do teste. Portanto, as técnicas de imuno-histoquímica devem ser otimizadas e a qualidade dos anticorpos garantida.
Marcadores imunohistoquímicos no diagnóstico clínico
Essa tecnologia se tornou uma ferramenta importante na pesquisa em neurociências, não apenas para confirmar a expressão de proteínas, mas também para identificar tumores. Por exemplo, os marcadores CD15 e CD30 são utilizados para a doença de Hodgkin, enquanto o PSA é utilizado para o diagnóstico do cancro da próstata.
Terapia Guiada
À medida que os tratamentos contra o câncer avançam, a imuno-histoquímica pode ser usada para avaliar quais tumores têm maior probabilidade de responder ao tratamento, detectando a presença de alvos moleculares. Os receptores hormonais em certos tumores podem ser confirmados por sinais imuno-histoquímicos, o que pode ajudar a melhorar a implementação da terapia personalizada.
Portanto, a imuno-histoquímica não é apenas uma ferramenta de diagnóstico, mas também um componente chave no processo de tratamento clínico.
Em resumo, a imuno-histoquímica nos fornece uma ferramenta poderosa para identificar e localizar biomarcadores nos níveis celular e tecidual. No entanto, como podemos otimizar ainda mais esta tecnologia para melhor servir as comunidades médicas e de investigação no futuro?
