Chiara Gagliardone

Immunity to Polyomavirus BK Infection: Immune Monitoring to Regulate the Balance between Risk of BKV Nephropathy and Induction of Alloimmunity

Polyomavirus BK-associated nephropathy (PyVAN) is the main infectious cause of allograft damage after kidney transplantation. A number of studies revealed an association between the presence of BKV-specific cellular immunity and BK viral clearance, with patients failing to recover specific T cells progressing to PyVAN. Evolution to allograft dysfunction can be prevented by restoration of BKV-specific immunity through a stepwise reduction of maintenance immunosuppressive drugs. Prospective monitoring of BK viral load and specific immunity, together with B-cell alloimmune surveillance, may allow a targeted modification/reduction of immunosuppression, with the aim of obtaining viral clearance while preventing graft injury due to deposition of de novo donor-specific HLA antibodies and late/chronic antibody-mediated allograft injury. Innovative, immune-based therapies may further contribute to BKV infection prevention and control.

The impact of viral respiratory infections in the first year post-transplant period of pediatric hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients

no: 187 Presentation at ESCV 2016: Poster 155 BK virus infections in renal transplant recipients N. Kasifoglu ∗, M. Aslan, A. Cifci, T. Us Eskisehir Osmangazi University, Faculty of Medicine, Department of Microbiology, Eskisehir, Turkey The BK virus is a member of the polyomavirus family. Infections with BK virus are widespread with a seroprevalence of around 80% in the general population. Following an asymptomatic primary infection, BK virus remains latent in healthy subjects. Reactivation occurs in immunocompromised patients. BK virus is pathogenic mainly among patients who have received a kidney transplant, in whom the virus can cause specific tubulo-interstitial nephritis and even result in graft failure among approximately 20–30% of nephritic cases. The cornerstone of BK virus infection or BK virus-associated nephropathy treatment is to decrease the immunosuppressive regimen, which must then be offset with the risk of rejection. BK Virus Nephropathy (BKVN) occurs in up to 10% of renal transplant recipients (RRT) and can result in graft loss in up to 50% of those affected. In this study, we retrospectively analyzed the presence of BK virus in plasma and urine samples of patients applied to the Nephrology Clinic of our hospital between 2010–2015. BK virus DNA was determined by real-time PCR using artus BK virus RG PCR kit (Qiagen, Germany) on the Rotor-Gene system (Corbett Research, Australia). The analytical sensitivity of the kit is 0.195 copies/ l according to the user manual. A total of 243 samples (urine and plasma) from 131 patients (69 male, 62 female), ages ranging from 20 to 72 were enrolled. BK virus DNA was detected in 56 (38.6%) urine samples and in 27 (13.1%) plasma samples. In 19 simultaneously sent urine and plasma sample pairs of 13 patients, BK virus DNA was positive. The minimum and maximum DNA levels of positive urine and plasma samples were as 4–1.4 × 108 copies/ml and 6–5.3 × 104 copies/ml respectively. In conclusion quantitative viral load monitoring for BK virus (BKV) in urine and plasma samples by real-time PCR is an important tool in the management of polyomavirus associated nephropathy in renal transplant patients. http://dx.doi.org/10.1016/j.jcv.2016.08.195 Abstract no: 190 Presentation at ESCV 2016: Poster 156 The impact of viral respiratory infections in the first year post-transplant period of pediatric hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients Antonio Piralla 1,∗, Chiara Gagliardone 2, Alessia Girello 1, Marta Premoli 1, Giulia Campanini 1, Nunzia Decembrino 2, Laura Rubert 2, Patrizia Comoli 2, Marco Zecca 2, Fausto Baldanti 1,3 1 Molecular Virology Unit, Microbiology and Virology Department, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy 2 Pediatric Hematology-Oncology and Research Laboratories, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy 3 Section of Microbiology, Department of Clinical, Surgical, Diagnostic and Pediatric Sciences, University of Pavia, Pavia, Italy Background: Infection caused by respiratory viruses (RV) is a threat for hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. RVs in HSCT patients with respiratory syndromes should be strictly monitored in the pre-engraftment or early post-transplantation period and in patients with acute or chronic GVHD. Due to the high morbidity and mortality rates associated with RVs infections and the lack of directed antiviral therapy for most of these infections, prevention remains the mainstay for reducing their incidence and controlling transmission in HCT recipients. This retrospective study aimed to investigate the incidence and the duration of respiratory episodes caused by viruses in pediatric HSCT recipients. Material and methods: Patients who underwent allogeneic or autologous HSCT at Pediatric Hematology–Oncology Unit, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia from January 2010 to December 2014 were analyzed. Respiratory samples from patients with respiratory syndromes were routinely tested using a panel of RT-PCR and real-rime RT-PCR assays for 12 respiratory viruses within the first year post-transplant. Results: One hundred eighty-six HSCT recipients including 158 (84.9%) allogenic (80 MUD, 56 PMFD, 21 MFD, and 1 sibling) and 28 (15.1%) autologous transplants were evaluated. In 118/186 (63.4%) patients at least one respiratory episode caused by viruses was identified, while 68/186 (36.6%) patients were negative. Among positive patients, 73/118 (61.9%) had a single viral respiratory episode, while 45/118 (38.1%) had multiple episodes (29 with 2 episodes, 8 with 3, 8 with 4 and 1 with 6). In patients with multiple viral episodes, the first episode was observed significantly earlier (median 17.5 days; range 1–349 days) than patients experiencing a single viral episode (median 62 days; range 1–358 days; p = 0.01). A total of 192 viral episodes, including 174 (90.6%) single infections and 18 (9.4%) co-infections were observed. Among episodes sustained by a single virus, HRVs were the most prevalent viruses with 54.0% followed by respiratory syncytial virus (13.2%), human coronaviruses (9.2%), human parainfluenza viruses (8.0%), influenza A (6.3%), adenovirus (6.3%), and influenza B (2.9%). Twenty-seven episodes (14.0% of total) of prolonged infections defined as viral shedding ≥30 days were observed. The median duration of viral shedding was 64 days (range 30–159 days). In 18/27 (66.6%) patients, the onset of infection occurred during the induction and before transplant engraftment (<30 days from TX). In these patients, the duration of viral episodes was higher than those observed in the remaining 9 patients, in which the onset Abstracts / Journal of Clinical Virology 82S (2016) S1–S142 S99s / Journal of Clinical Virology 82S (2016) S1–S142 S99 of infections occurred after the engraftment (>30 days from TX) (p = 0.02). Conclusions: Among pediatric HSCT recipients, viral respiratory infections in the post-transplant period are frequent and sometimes prolonged. Preventive measures must be tightened in this population in order to reduce the derived morbidity and mortality. http://dx.doi.org/10.1016/j.jcv.2016.08.196 Abstract no: 259 Presentation at ESCV 2016: Poster 157no: 259 Presentation at ESCV 2016: Poster 157 Normalizing ELISPOT to quantify human cytomegalovirus (HCMV) and Epstein Barr-virus (EBV) specific T-cell response in kidney transplant recipients C. Fornara 1,∗, I. Cassaniti 1, S.A. Calarota 1, K.M.G. Adzasehoun 1, L. Scaramuzzi 2, G. Comolli 3, F. Baldanti 1,4 1 Molecular Virology Unit, Microbiology and Virology Department, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy 2 Nephrology, Dialysis and Transplantation Unit, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy 3 Molecular Virology Unit, Microbiology and Virology Department – Experimental Research Laboratories, Biotechnology Area, Fondazione IRCCS Policlinico San Matteo, Pavia, Italy 4 Department of Clinical, Surgical, Diagnostic and Pediatric Sciences, University of Pavia, Italy Background: Herpes virus infection or reactivation are major complications in solid organ transplant recipients. Virus-specific T-cell response is crucial to control infection. Methods: HCMV and EBV specific CD4+ and CD8+ T-cell response were investigated in 29 kidney transplant recipients by a novel approach of enzyme-linked immunospot assay (ELISPOT). Overlapping 15-mer peptide pools of HCMV proteins immediate early IE-1, IE-2 and phosphoprotein pp65, and of EBV lytic (BZLF1 and BMRF1) and latent (EBNA1, EBNA3a, EBNA3b, EBNA3c, LMP1 and LMP2) proteins were used for stimulation of both CD4+ and CD8+ HCMV-specific and EBV specific T-cells, respectively. Virological and immunological monitoring were performed for one year of follow-up. Results: As for HCMV infection, 13/19 (68.4%) HCMV seropositive recipients showed levels of HCMV replication <100,000 DNA copies/ml blood and did not required anti-viral treatment, while 6/19 (31.6%) HCMV-seropositive patients were treated since showing ≥100,000 HCMV DNA copies/ml blood. Patients with spontaneous control of infection showed, at 120 days after transplant, levels of HCMV specific CD4+ T-cells significantly higher with respect to patients who needed treatment. HCMV specific T-cell response to single HCMV proteins (pp-65, IE-1, IE-2) was examined: pretransplant number of both CD4+ and CD8+ specific T cells directed against IE-1 showed significantly higher level in patients controlling infection and their level remained significantly higher until 120 days. No difference was shown for pp-65 and IE-2 between the two groups of patients. In addition, 5 HCMVseronegative recipients receiving organ from HCMV seropositive donor (D+/R−), were examined: 4/5 developed a primary infection within one month from transplantation and required antiviral treatment. HCMV-specific CD4+ T-cells remained significant lower with respect to patients able to control infection until 120 days after transplantation. As for EBV infection, 3/29 (10.3%) EBV-seropositive patients reaching levels of EBV ≥10,000 DNA copies/ml blood did not showed EBV-specific T-cell response for the entire period considered. However, EBV-specific T-cell response was detected in only 8/20 (40%) patients examined at 1 year follow-up, regardless of the presence of EBV DNA in blood. Conclusions: Normalizing ELISPOT may be a simple and useful tool to perform immunological monitoring in solid organ transplant recipients and to detect herpes virus specific response. However, while the importance of HCMV-specific T-cell response to control HCMV infection is evident, further studies are required to better define the role of EBV-specific T-cell response. http://dx.doi.org/10.1016/j.jcv.2016.08.197 Abstract no: 272 Presentation at ESCV 2016: Poster 158no: 272 Presentation at ESCV 2016: Poster 158 BK polyomavirus-seroreactivity increases with virus replication H.F. Wunderink 1,∗, E. van der Meijden 1, C.S. van der Blij-de Brouwer 1, H.L. Zaaijer 2, A

Trattamento della PTLD tipo linfoma di Hodgkin con chemioterapia a dosaggio ridotto e linfociti T citotossici EBV-specifici in un ricevente pediatrico di trapianto cardiaco

Tra i disordini linfoproliferativi post-trapianto monomorfici Epstein-Barr Virus-correlati (PTLD), la PTLD linfoma di Hodgkin (LH)-type e infrequente ed il suo sviluppo a distanza di anni da una prima PTLD istologicamente diversa e un’eventualita ancora piu rara. Poiche le PTLD LH-type sono rare, non esistono linee guida terapeutiche univoche. I pazienti descritti in letteratura sono stati trattati con chemioterapia/radioterapia usata per il LH classico, con prognosi migliore rispetto ad altri tipi istologici di PTLD monomorfiche. Il caso clinico descritto e quello di un paziente pediatrico ricevente di trapianto di cuore affetto da PTLD LH-type EBV-correlato, sviluppatosi otto anni dopo la diagnosi di PTLD polimorfica B-cellulare. Lo schema terapeutico adottato (chemioterapia standard per il LH a dosaggio ridotto e infusione di CTL autologhi EBV-specifici), si e dimostrato efficace. A due anni dallo stop-terapia, il paziente e in remissione completa, in terapia immunosoppressiva di mantenimento e con funzionalita d’organo stabile. La strategia adottata potrebbe consentire di riprodurre gli ottimi risultati, in termini prognostici, riportati in letteratura per il trattamento standard delle PTLD tipo LH, con il vantaggio di ridurre il rischio di tossicita d’organo e di rigetto legati al trattamento chemioterapico classico.

Valutazione del ruolo di alcuni batteri lattici in soggetti in età pediatrica sottoposti a trapianto di cellule staminali emopoietiche

Lo studio si propone di analizzare la fattibilita di un trattamento con probiotici per la prevenzione delle complicanze gastrointestinali e delle infezioni in riceventi pediatrici di trapianto di cellule staminali emopoietiche, alla luce del dibattito tuttora in corso sulla sicurezza di impiego dei probiotici nell’ospite immunocompromesso, valutandone l’impatto sulla composizione della flora fecale, sul profilo della ricostituzione immunologica e sull’outcome clinico.

Convulsioni Neonatali Benigne Familiari da mutazione di KCNQ2

Le Convulsioni Neonatali Benigne Familiari sono un raro disordine convulsivo ad ereditarieta AD che si manifesta entro la seconda settimana di vita. Ad oggi sono stati identificati 2 geni responsabili: KCNQ2 e KCNQ3. Riportiamo il caso di F.G., ricoverata per convulsioni neonatali insorte in terza giornata di vita, refrattarie alla terapia antiepilettica. Nella storia clinica del padre emergeva identica sintomatologia (fino al 25° giorno di vita); inoltre, due cugine paterne risultavano affette da differenti disordini comiziali. Anche nel caso di F.G. si verificava una completa risoluzione delle manifestazioni comiziali al compimento del 25° giorno di vita. Ad oggi la bambina (6 mesi di vita) presenta un normale sviluppo psico-motorio. L’analisi genetica Next Generation Sequencing ha potuto evidenziare nella bambina e nel padre una mutazione del gene KCNQ2, a livello dell’esone 5: C.769del. Tale mutazione comporta un frameshift della sequenza codificante con STOP codon prematuro 15 codoni a valle.

Vocal cord dysfunction nel bambino

La vocal cord dysfunction (VCD) e una paradossa adduzione delle corde vocali che si verifica durante l’inspirazione, con conseguenti sintomi di dispnea, respiro sibilante, senso di oppressione al torace o alla gola e tosse. Essendo poco conosciuta, questa condizione viene spesso confusa con l’asma con conseguente utilizzo di trattamento anti-asmatico inefficace. La dimostrazione laringoscopica di adduzione delle corde vocali durante l’inspirazione e considerata il gold standard per la diagnosi di VCD. La logopedia e/o la fisioterapia respiratoria sono spesso utili in questo disturbo. Riportiamo il caso di un ragazzo di 12 anni con persistenti spasmi laringei, giunto alla nostra attenzione dopo diverse visite mediche senza diagnosi. Abbiamo diagnosticato la vocal cord dysfunction associata ad ipotiroidismo autoimmune e ad infezione da Bordetella pertussis, con risoluzione del caso a seguito del trattamento specifico.

Una febbre di difficile interpretazione: il caso di Diego

La tubercolosi e una malattia infettiva causata dal Mycobacterium Tuberculosis. Sebbene in Italia sia ritenuta una patologia rara, e considerata la seconda causa di morte nel mondo dall’Organizzazione Mondiale della Sanita (OMS). La diversita delle presentazioni cliniche e la natura non specifica della maggior parte dei sintomi rendono l’iter diagnostico molto complesso, ma una precoce diagnosi e l’impostazione di un’idonea e tempestiva terapia farmacologica sono indispensabili per prevenirne la diffusione e per assicurare il recupero di un corretto accrescimento. Il caso clinico descritto e quello di un lattante marocchino di 6 mesi giunto alla nostra attenzione per febbre persistente e se, da un lato, evidenzia la complessita diagnostica dettata dalla netta prevalenza di sintomi generali aspecifici su quelli d’organo, dall’altro lato, sottolinea come siano fondamentali un’accurata anamnesi, un attento esame obiettivo e degli esami che siano il piu possibile mirati sulla base del sospetto diagnostico.

Una causa eccezionale di tumefazione laterocervicale

Il timo ectopico e una causa eccezionale di tumefazione laterocervicale. Si tratta di una condizione benigna, piuttosto rara, con un centinaio di segnalazioni in letteratura. Circa il 10% dei casi si verifica nel lattante ed il 90% dei pazienti giunge alla diagnosi per massa cervicale laterocervicale, in assenza di altra sintomatologia. Descriviamo il caso clinico di un lattante con timo ectopico cervicale.

Uno strano caso di febbre persistente

La febbre di origine sconosciuta (FUO) e stata descritta per la prima volta nel 1961 come una febbre documentata e persistente da almeno 2 settimane associata alla negativita di un esame obiettivo accurato e dei principali accertamenti diagnostici. E una condizione di difficile diagnosi per il pediatra e spesso tale quadro clinico richiede lunghi periodi prima di essere definita. Le principali cause di FUO possono essere suddivise in quattro gruppi principali: infettive, infiammatorie, neoplastiche o altre cause. Il caso clinico descritto e quello di un ragazzo di 15 anni giunto alla nostra attenzione per febbre persistente da oltre 8 mesi e se da un lato ci consente di focalizzare l’attenzione su quanto complessa sia la gestione e la diagnosi delle febbri di origine sconosciuta, soprattutto in presenza di sintomi estremamente aspecifici quali quelli riferiti dal paziente in esame, dall’altro ci permette di sottolineare come risultino fondamentali, nella valutazione di questi pazienti, un’accurata anamnesi, un attento esame obiettivo e degli esami che siano il piu possibile mirati sulla base del sospetto diagnostico. Questo ci ha permesso, nonostante la quasi totale assenza di sintomatologia gastroenterica nel nostro paziente, di porre diagnosi di Morbo di Crohn, una condizione clinica molto eterogenea con presentazione che, in alcuni casi, puo essere molto sfumata e non presentare all’esordio la classica triade sintomatologica (dolore addominale, diarrea spesso muco-ematica e calo ponderale).

Sindrome Iper-IgE: identificazione di una nuova mutazione

La Sindrome Iper-IgE o Sindrome di Giobbe e una rara immunodeficienza primitiva caratterizzata da eczema cutaneo, ascessi cutanei recidivanti, infezioni ricorrenti delle alte e basse vie respiratorie con formazione di pneumatoceli ed elevati livelli di IgE policlonali nel siero. Si tratta di un disordine multisistemico con coinvolgimento del sistema immunitario, dell’apparato scheletrico, dei tessuti connettivi ed anomalie cardiovascolari. Ha un’incidenza stimata di circa 1/100,000 nati vivi, senza prevalenza di sesso e razza. Esordisce comunemente in epoca neonatale. Ad oggi sono stati descritti circa 250 pazienti. Esistono due varianti della Sindrome Iper-IgE: la mutazione del gene per il Signal Transducer and Activator of Transcription 3 (STAT3) determina la forma autosomica dominante, mentre mutazioni a carico dei geni per la Tyrosine Kinase 2(Tyk2) e per il Dedicator of Cytokinesis 8 (DOCK8) sono responsabili della forma autosomica recessiva. Data la presenza di livelli di IgE sieriche molto elevati esiste nozione in letteratura di un rischio aumentato in questi soggetti di reazioni allergiche gravi fino allo shock anafilattico, ma risulta difficile risalire ad un caso investigato e francamente associato alla sindrome di Giobbe. Descriviamo il caso clinico di X.Y. seguito fin dalla nascita presso il nostro centro con diagnosi di sindrome Iper-IgE su base clinica dall’eta di 13 mesi. Il paziente torna alla nostra attenzione per una reazione allergica grave dopo assunzione di pinoli. Nell’ambito del workup immunoallergologico e stato eseguito il sequenziamento del gene STAT3 che ha evidenziato una nuova mutazione in un sito poco coinvolto da mutazioni e fino ad oggi mai descritto.